自1885年法国微生物学家Louis Pasteur首次研制人用狂犬病疫苗以来，狂犬病疫苗的发展历经了神经组织疫苗、禽胚疫苗、细胞培养疫苗等不同阶段，现代细胞培养狂犬病疫苗已被证实具有较好的免疫原性和安全性。2018年WHO立场文件中鼓励在不影响安全性的情况下降低预防狂犬病的成本，例如开发成本较低的疫苗、缩短PEP和PrEP的时间。如今，在多个国家多种新型疫苗正在研发，本文将对已进入临床试验阶段的狂犬病新型基因工程疫苗进行介绍。

蛋白质疫苗

▲Thrabis?产品发布会（图源：NetIndian News Network）

印度Cadila Pharmaceuticals公司基于病毒样颗粒（VLP）技术开发了一种新型重组纳米颗粒狂犬病G蛋白疫苗（Thrabis?），该疫苗Ⅰ/Ⅱ临床试验旨在探索适合的剂量和免疫程序，未公布临床结果。Ⅲ期临床试验结果于2021年9月9日发表在《Human Vaccines & Immunotherapeutics》上，实验组在第0、3、7天接种了3剂新型疫苗，对照组在第0、3、7、14和28天接种了5剂Rabipur?，在免疫原性方面，第14天两组阳性率分别为99.24%和97.72%，第42天两组阳性率分别为98.69%和100.00%，无显著差异；对照组不良事件发生率17.2%显著高于实验组9.9%，结果表明3剂新型狂犬病疫苗（Thrabis?）具有良好的安全性和免疫原性。

注：杆状病毒表达系统能进行糖基化、磷酸化等修饰且具有表达量高等优点，已被广泛用于蛋白质亚单位疫苗的制备。蛋白质狂犬病疫苗的安全性和免疫原性已得到评估，但其生产过程需要添加大量的佐剂和纯化，成本效益过高，大规模推广应用可能会受到一定的限制。

病毒载体疫苗

Cadoz和Fries等人将构建出的金丝雀痘病毒重组狂犬病疫苗（ALVAC-RG）进行了人体临床观察，该疫苗首项Ⅰ期临床试验结果于1992年发表在《The Lancet》上， 25名健康受试者分四组在0、28和180天皮下接种不同剂量的ALVAC-RG和HDCV，2剂ALVAC-RG接种后28天的中和抗体水平低于HDCV，6个月后的第3剂加强能够诱发免疫记忆反应，安全性方面与HDCV类似。1996年《Vaccine》上发表了另一项Ⅰ期临床试验，三组健康受试者在0、28和180天肌内接种了不同剂量的ALVAC-RG，虽然ALVAC-RG在人体中进行的试验是安全的，但与HDCV对照组相比免疫原性仍然较低。在上述临床试验中，第1剂的ALVAC-RG几乎不会引起明显的抗体反应，2剂可产生中和抗体，但与市售疫苗相比，ALVAC-RG没有优势。

英国牛津大学詹纳研究所研发了一种模拟腺病毒感染的狂犬病候选疫苗（ChAdOx2 RabG），该疫苗的Ⅰ期临床试验结果于2022年7月27日发表《The Lancet Microbe》上。研究招募了12名受试者分三组分别接受低、中、高剂量单剂接种，在接种疫苗后第56天除了低剂量组的1名受试者之外其他所有人都获得了足够的抗体，一年后随访大多数人仍存在保护性抗体，加强接种后具有较好的免疫记忆反应，未发生严重不良反应。单剂ChAdOx2 RabG显示出了较好的的免疫应答和临床耐受性，目前该疫苗在坦桑尼亚的一项1b–2期试验正在进行中。

注：非复制病毒载体可用于狂犬病病毒疫苗的研究并具有高度的安全性，目前研究最多的是痘病毒载体疫苗和腺病毒载体疫苗。痘病毒载体疫苗免疫原性仍比不上现行疫苗，腺病毒载体疫苗可以诱导良好的免疫应答，且安全性好、制备简单、成本低，有望发展为新一代人用狂犬病疫苗。

mRNA疫苗

CureVac公司研发的基于鱼精蛋白的第一代mRNA疫苗CV7201是第一个在健康人群中开展概念验证研究的mRNA疫苗，其Ⅰ期临床试验结果于2017年7月25日发表在《The Lancet》上。研究共纳入了101名受试者通过针头注射或无针头注射共接种306剂CV7201，结果显示总体不良反应率高、针头注射组的免疫原性很差，需要进一步优化给药技术。之后CureVac公司利用脂质纳米粒子（LNP）递送技术开发了第二代mRNA疫苗CV7202，其Ⅰ期临床结果于2021年1月22日发表在《Vaccine》上，结果表明两剂CV7202可产生适应性免疫反应，不良反应发生率仍比现行疫苗高，CureVac公司官网显示目前CV7202的研究仍停留在第一阶段。

▲LNP mRNA制剂作用方式示意图（图源：参考资料[7]）

注：mRNA疫苗可在有效递呈系统递送下进入细胞，表达目的抗原，从而刺激机体产生免疫应答。根据相关综述，mRNA疫苗具有快速、低成本和大规模生产的潜力，但缺点是在人体内产生免疫所需时间长，在人群中长期应用的安全性也有待考察。

结语：新型基因工程狂犬病疫苗剂次的减少可以降低狂犬病预防成本和提高依从性，这对于实现2030年消除犬类介导的人类狂犬病的目标十分重要。蛋白质疫苗、病毒载体疫苗和mRNA疫苗都是未来人用狂犬病疫苗的重点研究方向，除了上述疫苗以外，还有很多新型疫苗开展了临床前研究，但在人体中的研究尚不明确，需要更多的临床试验证实其免疫原性和安全性， 为进一步开发人用狂犬病疫苗提供可行策略。

参考资料：

[1] HS R, Khobragade A, Satapathy D, et al. Safety and Immunogenicity of a novel three-dose recombinant nanoparticle rabies G protein vaccine administered as simulated post exposure immunization: A randomized, comparator controlled, multicenter, phase III clinical study[J]. Human Vaccines & Immunotherapeutics, 2021, 17(11): 4239-4245.

[2] Cadoz M, Strady A, Meignier B, et al. Immunisation with canarypox virus expressing rabies glycoprotein[J]. The Lancet, 1992, 339(8807): 1429-1432.

[3] Fries L F, Tartaglia J, Taylor J, et al. Human safety and immunogenicity of a canarypox-rabies glycoprotein recombinant vaccine: an alternative poxvirus vector system[J]. Vaccine, 1996, 14(5): 428-434.

[4] Jenkin D, Ritchie A J, Aboagye J, et al. Safety and immunogenicity of a simian-adenovirus-vectored rabies vaccine: an open-label, non-randomised, dose-escalation, first-in-human, single-centre, phase 1 clinical trial[J]. The Lancet Microbe, 2022, 3(9): e663-e671.

[5] Alberer M, Gnad-Vogt U, Hong H S, et al. Safety and immunogenicity of a mRNA rabies vaccine in healthy adults: an open-label, non-randomised, prospective, first-in-human phase 1 clinical trial[J]. The Lancet, 2017, 390(10101): 1511-1520.

[6] Aldrich C, Leroux–Roels I, Huang K B, et al. Proof-of-concept of a low-dose unmodified mRNA-based rabies vaccine formulated with lipid nanoparticles in human volunteers: A phase 1 trial[J]. Vaccine, 2021, 39(8): 1310-1318.

[7] Armbruster N, Jasny E, Petsch B. Advances in RNA vaccines for preventive indications: a case study of a vaccine against rabies[J]. Vaccines, 2019, 7(4): 132.